ⅠNacid ucleiciintroducere
Acidul nucleic este împărțit în acid dezoxiribonucleic (ADN) și acid ribonucleic (ARN), printre care ARN-ul este împărțit în ARN ribozomal (ARNr), ARN mesager (ARNm) și ARN de transfer (ARNt) în funcție de diferitele sale funcții.ADN-ul este concentrat în principal în nucleu, mitocondrii și cloroform, în timp ce ARN-ul este distribuit în principal în citoplasmă.Ca bază materială a expresiei genelor, extracția acidului nucleic joacă un rol extrem de important în cercetarea în biologie moleculară și diagnosticul molecular clinic.Concentrația și puritatea extracției acidului nucleic vor afecta direct PCR-ul ulterioare, secvențierea, construcția vectorului, digestia enzimatică și alte experimente.
Ⅱ Metoda de extracție și purificare a acidului nucleic
① Metoda de extracție cu fenol/cloroform
Extracția cu fenol/cloroform este o metodă clasică de extracție a ADN-ului, care utilizează în principal doi solvenți organici diferiți pentru a trata probele, dizolvând acidul nucleic pe bază de ADN în faza apoasă, lipidele în faza organică și proteinele între cele două faze.Această metodă are avantajele costului scăzut, purității ridicate și efectului bun.Dezavantajele sunt operarea complicată și durata lungă.
② Metoda Trizol
Metoda Trizol este o metodă clasică de extracție a ARN.Metoda Trizol este împărțită în fază apoasă și fază organică după centrifugare cu cloroform, în care ARN-ul este dizolvat în faza apoasă, faza apoasă este transferată într-un tub EP nou, se obține precipitarea după adăugarea izopropanolului și apoi purificarea cu etanol.Această metodă este potrivită pentru extracția ARN din țesuturi animale, celule și bacterii.
③ Metoda de purificare pe coloană centrifugă
Metoda de purificare a coloanei de centrifugare poate adsorbi ADN-ul în mod specific prin materiale speciale de adsorbție a matricei de siliciu, în timp ce ARN-ul și proteinele pot trece fără probleme, apoi folosesc sare ridicată cu PH scăzut pentru a combina acid nucleic, sare scăzută cu eluție cu valoare ridicată a PH pentru a separa și purifica acidul nucleic.Avantajele sunt concentrația ridicată de purificare, stabilitatea ridicată, nu este nevoie de solvent organic și costul scăzut.Dezavantajul este că trebuie centrifugat pas cu pas, mai multe etape de operare.
④ Metoda margelelor magnetice
Metoda margelelor magnetice este de a împărți proba de țesut celular prin lizat, de a elibera acidul nucleic din probă, iar apoi moleculele de acid nucleic sunt adsorbite în mod specific pe suprafața mărgelei magnetice, în timp ce impuritățile precum proteinele și zaharurile sunt lăsate în interior. lichidul.Prin etapele de scindare a țesutului celular, legarea granulelor magnetice cu acid nucleic, spălare cu acid nucleic, eluare cu acid nucleic etc., se obține în sfârșit acid nucleic pur.Avantajele sunt operarea simplă și utilizarea în timp scurt, fără a fi nevoie de centrifugare în trepte.Are cerințe tehnice scăzute și poate realiza funcționare automată și în masă.Combinația specifică de mărgele magnetice și acid nucleic face ca acidul nucleic extras să aibă o concentrație și puritate ridicate.Dezavantajul este că prețul actual de piață este relativ scump.
⑤ Alte metode
În plus față de cele patru metode de mai sus, există fisurarea prin fierbere, metoda sării concentrate, metoda detergentului anionic, metoda ultrasonică și metoda enzimatică etc.
Ⅲ Tip de extracție a acidului nucleic
Foregene are cea mai importantă platformă PCR directă din lume, platformă de izolare a ARN cu două coloane (doar ADN + numai ARN).Principalele produse includ truse de izolare ADN/ARN, serii de reactivi de laborator molecular pentru PCR și PCR directă.
① Extracția totală de ARN
Probele de extracție a ARN total includ sânge, celule, țesuturi animale, plante, viruși etc. Puritatea ridicată și concentrația ridicată de ARN total pot fi obținute prin extracția totală de ARN, care poate fi utilizat în RT-PCR, analiza cipurilor, traducerea in vitro, clonarea moleculară, Dot Blot și alte experimente.
Legat de gena anterioarăTruse de izolare ARN
Kit de izolare a ARN total animal--Extrageți rapid și eficient ARN total de înaltă puritate și de înaltă calitate din diferite țesuturi animale.
Kit de izolare a ARN total al celulelor--ARN total foarte purificat și de înaltă calitate poate fi obținut din diferite celule cultivate în 11 minute.
Kit de izolare a ARN total al plantelor--Extrageți rapid ARN total de înaltă calitate din probe de plante cu conținut scăzut de polizaharide și polifenoli.
Kit de izolare a ARN viral--Izolați și purificați rapid ARN-ul viral din probe precum plasmă, ser, fluide corporale fără celule și supernatanți de cultură celulară.
② Extracția ADN-ului genomic
Probele de extracție a ADN-ului genomic includ sol, fecale, sânge, celule, țesuturi animale, plante, viruși etc. Extracția ADN-ului genomic poate fi utilizată în digestia cu enzime, construcția bibliotecii de ADN, PCR, prepararea anticorpilor, analiza de hibridizare Western blot, cip genetic, înaltă -secvențierea debitului și alte experimente.
Legat de gena anterioarăTruse de izolare ADN
Kit de izolare ADN țesut animal- Extracția și purificarea rapidă a ADN-ului genomic din surse multiple, cum ar fi țesuturi animale, celule etc.
Kit Blood DNA Midi (1-5 ml)- Purifică rapid ADN-ul genomic de înaltă calitate din sângele anticoagulat (1-5 ml).
Kit de izolare ADN pentru tampon bucal/FTA Card- Purificați rapid ADN-ul genomic de înaltă calitate din probe de tampon bucal/FTA Card.
Kit de izolare ADN din plante- Purificați și obțineți rapid ADN genomic de înaltă calitate din probe de plante (inclusiv polizaharide și mostre de plante polifenoli)
③ Extracția plasmidelor
Plasmida este un fel de moleculă circulară mică de ADN din celule, care este un purtător comun pentru recombinarea ADN-ului.Metoda de extracție a plasmidei este de a îndepărta ARN-ul, de a separa plasmida de ADN-ul genomic bacterian și de a îndepărta proteinele și alte impurități pentru a obține o plasmidă relativ pură.
Mini Kit General Plasmid- Purificați rapid ADN-ul plasmidic de înaltă calitate din bacteriile transformate pentru experimente de rutină de biologie moleculară, cum ar fi transformarea și digestia enzimatică
④ Alte tipuri de extracție, extracția miARN etc.
Kit de izolare miARN animal- Extrageți rapid și eficient fragmente mici de ARN de 20-200nt miARN, siARN, snRNA din diferite țesuturi și celule animale
Ⅳ Cerințe pentru extracția acidului nucleic și rezultatul purificăriis
① Pentru a asigura integritatea structurii primare a acidului nucleic.
② Reduceți interferența proteinelor, zaharurilor, lipidelor și a altor macromolecule
③ Nu ar trebui să existe solvent organic sau concentrație mare de ioni metalici care pot inhiba enzima în probele de acid nucleic.
④ ARN și alte contaminari cu acid nucleic ar trebui eliminate la extragerea ADN-ului și invers.
Ora postării: 24-nov-2022
